CCK8試劑盒的使用注意事項(xiàng)

　　CCK8試劑盒相較于早期的MTT方法，CCK8試劑盒因采用水溶性的WST-8試劑，避免了反復(fù)吹打或離心步驟對(duì)細(xì)胞層的物理干擾，同時(shí)消除了顆粒物散射導(dǎo)致的信號(hào)偏差，提升了檢測(cè)精度。整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程無(wú)需額外的裂解或洗滌步驟，加入試劑后可直接孵育并讀取結(jié)果，大大縮短了實(shí)驗(yàn)周期。此外，該試劑盒支持高通量篩選模式，適用于大規(guī)模藥物測(cè)試和科研場(chǎng)景。
 

　　與傳統(tǒng)放射性同位素標(biāo)記技術(shù)相比，CCK8摒棄了放射性物質(zhì)的使用，降低了生物安全隱患和廢棄物處理成本。其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定且無(wú)毒副作用的特點(diǎn)也使其更適合長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)細(xì)胞狀態(tài)。從基礎(chǔ)研究到應(yīng)用開發(fā)均表現(xiàn)出色，包括但不僅限于藥物篩選、細(xì)胞毒性評(píng)估、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子活性分析等領(lǐng)域。
 

　　CCK8試劑盒的使用注意事項(xiàng)：
 

　　1.細(xì)胞狀態(tài)控制
 

　　-確保細(xì)胞健康且處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，衰老或污染的細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致脫氫酶活性下降，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。
 

　　-貼壁細(xì)胞需充分貼壁后再處理；懸浮細(xì)胞應(yīng)離心后重新懸浮，避免分布不均。
 

　　2.操作規(guī)范性
 

　　-避免氣泡：加樣時(shí)沿孔壁緩慢加入，減少氣泡生成(氣泡會(huì)散射光線，導(dǎo)致讀數(shù)偏差)。若有氣泡，可用無(wú)菌針頭刺破去除。
 

　　-防止污染：所有槍頭、耗材需滅菌處理，避免微生物污染影響細(xì)胞存活率。
 

　　-時(shí)間一致性：從加入CCK8到讀板的孵育時(shí)間必須嚴(yán)格統(tǒng)一(可設(shè)置定時(shí)器提醒)，因顯色速度與細(xì)胞代謝相關(guān)，時(shí)間差異會(huì)改變OD值。
 

　　3.干擾因素排除
 

　　-培養(yǎng)基成分干擾：含酚紅的培養(yǎng)基可能在450 nm附近有吸收峰，建議使用無(wú)酚紅培養(yǎng)基；血清濃度過(guò)高也可能影響透光率，需保持各孔血清比例一致。
 

　　-藥物顏色干擾：若待測(cè)藥物本身有色(如藍(lán)色、紫色)，需設(shè)置額外的“背景校正孔”(不加細(xì)胞僅加藥物+CCK8)，測(cè)定其本底吸光度并扣除。
 

　　-揮發(fā)風(fēng)險(xiǎn)：孵育過(guò)程中蓋緊板蓋，防止邊緣孔培養(yǎng)基蒸發(fā)導(dǎo)致濃度變化(可在周邊空孔中加水或PBS密封)。
 

　　4.試劑保存與使用
 

　　-CCK8試劑需避光保存于2~8℃(避免冷凍結(jié)冰)，使用前恢復(fù)至室溫并混勻(顛倒數(shù)次即可，不可劇烈震蕩)。
 

　　-避免反復(fù)凍融，分裝保存以提高穩(wěn)定性；過(guò)期試劑可能導(dǎo)致顯色效率降低或背景升高。
 

　　5.其他優(yōu)化建議
 

　　-預(yù)實(shí)驗(yàn)必要性：初次使用時(shí)建議通過(guò)梯度時(shí)間和細(xì)胞密度測(cè)試確定檢測(cè)窗口期(如繪制生長(zhǎng)曲線)，確保OD值落在儀器線性范圍內(nèi)(通常0.2~1.5之間)。
 

　　-復(fù)孔數(shù)量：每組至少設(shè)置5個(gè)復(fù)孔，減少隨機(jī)誤差；標(biāo)準(zhǔn)差過(guò)大時(shí)需檢查細(xì)胞是否均勻分布或操作是否存在失誤。
 

　　-對(duì)照完整性：必須包含空白孔(僅培養(yǎng)基+CCK8)、無(wú)細(xì)胞對(duì)照孔(驗(yàn)證試劑自身是否有顏色變化)和未處理的正常細(xì)胞對(duì)照孔。